非冻型组织细胞RNA保存液
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非冻型组织细胞RNA保存液(RNAwait)是一种在较高温度下保存动物组织及细胞RNA样品的非冻型无毒溶液,它能迅速渗入细胞内,通过高效抑制RNase的活性而保存RNA的完整性。
保存条件:15–25℃,保质期2年。低温条件下有结晶析出时加热至37℃溶解后使用。
产品特点
1.操作简单,将组织剪薄浸没在RNAWAIT中即可使其RNA不被降解。
2.替代液氮,使样品的保存不需液氮,干冰或-80℃冰箱,尤其适用于临床和野外样品的快速和大规模采集。
3.RNA完整,因RNAwait能迅速抑制组织中RNA酶的活性,故从中提取的RNA的质量跟液氮保存的样品相比不相上下。
4.方便运输,处理过的样品能在25℃保存一周,使样品邮寄和运输变得容易和便宜,有利学术合作和交流。
5.反复冻融,经RNAwait处理的样品可反复冻融20次,其间可对样品进行各种处理而不影响最终提取的RNA的质量。
6.结果准确,RNAwait进入细胞十分快速,基因表达在发生应急改变前就得以锁定,故RNA分析更能反映取样时的真实情况。
7.可比性强,RNAwait能减少大规模样品处理中的误差,增加各次实验数据间的可比性,对大规模基因表达谱的分析尤其有用。
8.兼容性广,处理过的样品可以使用TRIzol 等试剂提取其RNA,样品还可直接用于组织切片,免疫学和流式细胞分析而不影响RNA的质量。
技术指标
37℃ 一天(保存三天的样品RNA有部分降解)
18-25℃ 一周(保存两周的样品RNA有轻微降解)
2-8℃ 一个月
-20℃和-80℃ 长期
操作流程:
1.根据要保存的各样本的体积,计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍(100mg组织约用1ml RNAwait);离心收集2×107细胞RNAwait的用量是1ml。加入RNAwait的原则是:量宁多勿少。建议在实际操作中不要称量组织,而直接根据目测结果加入RNAwait量,以加快操作和减少污染。例如5mm边长的立方体组织块,体积为125mm3=125µl,故应当加入1.25ml的RNAwait液。
2.将RNAwait按需要量分装入自备保存管中。
3.快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,较小的组织直接取下,立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较大的组织可以切成厚度<0.5 cm的任意片状后保存,较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)则可以直接浸入RNAwait。
4.将收集管存放于温度适当的地方,存放时间不能超过该温度下的最长存放时间(请看技术指标),如果要存放在-20℃或-80℃,需先将样品在4℃放置过夜后再转移到最后的温度。注:将样品转移到-20℃或-80℃前,需要弃掉保护液。
注意事项:
1.组织和细胞取材速度要快,在获取后应当尽快浸入RNAwait,以防止RNA降解。
2.冰冻组织不能用RNAwait保存,因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。
3.保存样品的RNA提取:样本从-20℃或-80℃冰箱取出后,复温到室温后,取出组织块,再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞,去除RNAwait,再用于提取RNA。后继的处理(如组织匀浆)可以在室温下进行,不必在液氮中操作,RNA仍能有效得到保护。残留少量RNAwait保存液不影响后继提取RNA的质量。
非冻型组织细胞RNA保存液
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